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生化檢驗(yàn) 糖化血紅蛋白的不同檢測(cè)方法

時(shí)間:2010-09-07 13:07來(lái)源:臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)考試 作者:lengke 點(diǎn)擊:
  

  目前,糖化血紅蛋白HbA1c作為糖尿病篩選、診斷、血糖控制、療效考核的有效檢測(cè)指標(biāo),在臨床中得到了廣泛的使用,其理由有二個(gè):目前HPLC法測(cè)定HbA1c使其準(zhǔn)確性和重復(fù)性得到很大的提高。美國(guó)臨床化學(xué)協(xié)(AACC)糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化分會(huì)和IFCCHbA1C標(biāo)準(zhǔn)化工作組建議,以DCCT研究中所“指定的方法”-HPLC方法作為檢測(cè)糖化血紅蛋白的金標(biāo)準(zhǔn),希望以此使大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)方法能夠參照“指定的方法”實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化。1993年美國(guó)1型糖尿病控制及并發(fā)癥實(shí)驗(yàn)(DCCT)和英國(guó)大規(guī)模的2型糖尿病控制與并發(fā)癥關(guān)系研究(UKPDS)的研究中把HbA1c作為糖尿病控制的一個(gè)觀察指標(biāo)。1996年4月起在日本,HbA1c被納入老年人保健法中糖尿病篩選的檢查項(xiàng)目。2002年美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)(ADA)已將其作為監(jiān)測(cè)糖尿病控制的金標(biāo)準(zhǔn),對(duì)其應(yīng)用也作了明確的規(guī)定:即所有糖尿病患者均應(yīng)常規(guī)測(cè)定HbA1c。其初診時(shí)測(cè)定結(jié)果為基線時(shí)的代謝狀況,此后的測(cè)定值則作為糖尿病長(zhǎng)期治療控制中的一部分,這樣在提高糖尿病診斷水平、血糖控制、慢性并發(fā)癥的防治中具有十分重要的應(yīng)用價(jià)值。

  目前通常認(rèn)為檢測(cè)HbA1c的臨床意義有三點(diǎn):

  在糖尿病的篩選普查中有早期提示的價(jià)值,可作為輕癥、2型、“隱性”糖尿病的早期診斷指標(biāo)。

  2.在糖尿病的治療中,HbA1C是評(píng)價(jià)血糖控制好壞的重要標(biāo)準(zhǔn)。

  3.預(yù)示微、小血管并發(fā)癥,估價(jià)糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展情況。糖化血紅蛋白的幾種不同檢測(cè)方法測(cè)定GHb主要是利用GHb和Hb的物理化學(xué)性質(zhì)的不同而進(jìn)行的,目前主要的檢測(cè)方法有5種:離子交換高效液相色譜分析法-檢測(cè)糖化血紅蛋白HbA1c的金標(biāo)準(zhǔn)基于Hbb鏈N末端纈氨酸糖化后所帶電荷不同而建立。在中性pH條件下,HbA1c攜帶的正電荷相對(duì)較少,因此可通過(guò)HPLC法將其與其它組分(HbA1c,HbA1b,HbA1a,HbF,HbA0)區(qū)分開(kāi),得到分離。此方法曾應(yīng)用于美國(guó)DCCT的研究,是目前檢測(cè)HbA1c的金標(biāo)準(zhǔn)。(2)微柱法微柱內(nèi)的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(如Biorex70)在PH近7時(shí)解離后帶陰電荷,而Hb解離后帶陽(yáng)電荷,二者可形成離子鍵。由于GHb的陽(yáng)電荷比HbA少,與樹(shù)脂的結(jié)合力相對(duì)低,容易被洗脫。用分光光度計(jì)分別測(cè)定洗脫液中GHb和溶血物中總Hb的吸光率(A),可計(jì)算出GHb占總Hb的百分比(%)。

  但此方法的影響影響因素比較多:

  1.洗脫溫度對(duì)結(jié)果有較大影響

  2.抗凝劑肝素能使測(cè)定結(jié)果增高

  3.某些血紅蛋白如HbF異常增加時(shí),也會(huì)與糖化血紅蛋白同時(shí)洗脫,從而使結(jié)果產(chǎn)生偏差(3)電泳法膠體顆粒在一定條件下可以帶有電荷,帶有電荷的膠體顆粒可以借靜電吸引力在電場(chǎng)中泳行,帶正電荷者泳向負(fù)極,帶負(fù)電荷者泳向正極,此種現(xiàn)象稱(chēng)為電泳。血清中各種蛋白質(zhì)都有它特有的等電點(diǎn),各種蛋白質(zhì)在各自的等電點(diǎn)時(shí)呈中性狀態(tài),它的分子所帶正電荷與所帶負(fù)電荷量相等。

  但此方法學(xué)的弱點(diǎn)是:

  1.需成批進(jìn)行樣本分析,速度比較慢,無(wú)法進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。

  2.自動(dòng)化程度低,急診插入、自動(dòng)維護(hù)等功能比較欠缺。(4)親和層析法利用生物高分子能與相應(yīng)的專(zhuān)一配基分子可逆結(jié)合的原理將配基通過(guò)共價(jià)鍵牢固地結(jié)合于固相載體上制得親和吸附系統(tǒng)。帶有雜質(zhì)的高分子分離目的物在一定條件下,能以某種次級(jí)鍵與已固相化的配基結(jié)合,而雜質(zhì)則不吸附,除去雜質(zhì)后變換條件,又可以使待分離的高分子物質(zhì)重新解離,獲得純化。除葡萄糖外,血液中所有的糖類(lèi)都可與Hb相結(jié)合,因此該方法的檢測(cè)結(jié)果為糖化血紅蛋白總量,而不是HbA1c的含量。(5)免疫法使用單克隆或多克隆抗體直接測(cè)定血紅蛋白β-鏈上糖基化的N末端的4-8個(gè)氨基酸,因此對(duì)HbA1C上的糖基特異性好。但是許多同源的糖化血紅蛋白變體也有相同的N末端結(jié)構(gòu),從而會(huì)對(duì)結(jié)果造成干擾。在定標(biāo)方面,需與HPLC作相關(guān)校正。綜合現(xiàn)在臨床實(shí)驗(yàn)室中常用的GHb測(cè)定方法,因?yàn)樵淼牟煌瑴y(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確度、重復(fù)性都有所差異。相信隨著對(duì)HbA1c實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化的重視和提高,HbA1c項(xiàng)目的檢測(cè)在臨床會(huì)得到越來(lái)越多的應(yīng)用。

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