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初級藥師考試輔導:丙型肝炎病毒的微生物學診斷

時間:2014-06-11 20:31來源:藥學職稱考試 作者:lengke 點擊:
  

  一、放射免疫診斷(RIA)或酶聯免疫試驗(ELISA)檢測血清中抗HCV

  1989年,Kuo等建立了抗-C-100放射免疫試驗方法(RIA),隨后Ortho公司又研制成功酶聯免疫試驗方法(ELISA)檢測抗-C-100.這兩種方法均用重組酵母表達的病毒抗原(C-100-3,為NS4編碼的蛋白,含363個氨基酸),經純化后包被微量塑料板孔,然后加被檢血清,該病毒抗原即與被檢血清中抗-C-100結合,最后加同位素或酶標記的鼠抗人lgG單克隆抗體,加底物顯色判斷結果。

  用上述酶聯免疫試驗法(ELISA)檢測抗-C-100有如下缺點:

  1. 抗-C-100出現較晚,約半數輸血后丙型肝炎病人于輸血后4~6個月抗—C-100首次陽轉,因此,不宜作為急性丙型肝炎的常規實驗室診斷;

  2.抗-C-100不是中和抗體,也不是lgM抗體,而是lgG抗體;

  3.本法不夠靈敏,少數丙型肝炎病人檢測不到抗-C-100;

  4.有非特異性,一些自家免疫性慢性肝病患者可出現假陽性,因此,抗HCV陽性需作重組免疫印跡試驗(Recombinant Immune BlotAssay,RIBA,或稱 Western Blot)證實。

  由于HCV核心抗體出現較早,因此,最近美國第二代酶聯免疫試驗法(ELISA)檢測抗HCV.該試劑盒采用HCVC區編碼蛋白C-22-3和非結構區NS3編碼蛋白C-33-3和C-100-3包被載體。用本法檢測抗HCV,其檢出率可提高25~30%,且檢出抗HDV的時間也可提早16~42天。

  二、HDV cDNA/聚合酶鏈反應(HCV cDNA/Polymerase Chain Reaction,RTPCR)測定肝和血清中HCV RNA.

  本法是將HDV RNA逆轉錄為HCV DNA,選用高度保守的5′非編碼區引物擴增放大后作電泳觀察結果。本法較靈敏。由于肝和血清中HCv RNA出現較抗-HCV為早,一些HCV感染者抗HCV尚未陽轉時,其肝和血清中已可測到HDv RNA.HCV RNA陽性,說明病毒在體內復制;HCV RNA陰轉,說明病毒被清除。因此,RT-PCR可作為丙型肝炎的早期診斷和獻血員篩查的出現指標,也可作為丙型肝炎預后的一個指標。

  三、免疫組化法檢測肝組織中HCV抗原

  感染HCV的黑猩猩或病人血清中提取lgG,用間接免疫熒光或間接免疫酶組化法檢測肝內HCV抗原。

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