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血液檢驗室內質控存在的若干問題及對策

時間:2009-12-16 14:26來源:臨床醫學檢驗技術考試 作者:lengke 點擊:
  

  室內質量控制(IQC)是實驗室人員采用一系列方法,連續評價本實驗室工作的可靠程度。確定報告能否發出,是保證實驗室工作質量的重要措施。目前采供血機構檢測抗HCV、抗HIV、HBsAg均采用ELISA法,ELISA有其自身的特點,如靈敏度較高,同時影響因素也較多,這就更需加強質量控制。本文就實驗室內過程中出現一些問題及其對策報告如下。
 
  1 質控物室內質控的開展要求有高質量的質控物,質控物的好壞直接影響監測,一般基層單位均選用衛生部臨檢中心或省檢驗中心提供的免疫質控血清,其具有良好的質量保證,但是在貯存運輸和使用過程中受許多因素的影響。質控物的購買應避開7月、8月、9月高溫季節,以免郵寄過程中造成含量下降。質控物要求-20 ℃保存,而質控物含量較低,4 ℃存放也會使含量下降。一般HBsAg使用3 d,抗HCV使用1周即需更換。避免反復凍融,因反復凍融能使蛋白質變性抗,原成分及空間構象發生改變。
 
  2 試劑從1994年10月起衛生部對診斷試劑實行統一管理批批檢定。目前使用的國內試劑廠家很多。能通過批批檢定只是起碼要求,其靈敏度和特異性都有差異。加之運輸儲存多種因素影響,到用戶使用時質量已經發生了不同程度的變化,盡管省放免中心對10多家試劑進行了初篩,但目前仍無權威部門發布的試劑評價結果,總之初檢試劑應選片段全,靈敏度高的,復檢選項特異性好的試劑。
 
  3 加樣與稀釋

  3.1 減少誤差由于免疫試劑加樣為10 μl,多加或少加1 μl就可造成10%的誤差,因此移液器的準確性需經常校驗,最好使用進口移液器,同時移液器和移液頭間連接應緊密,建議取樣時移液頭應剛進液面,以免粘帶血清。稀釋液勿用滴瓶滴加,以免造成稀釋倍數的變化,對灰帶區造成誤判,使用移液器加樣較穩定。
 
  3.2 稀釋方式在板中加入100 μl稀釋液再加10 μl標本,待樣品全部加完后混勻;預先進行1∶11倍稀釋然后加到每孔中;在板中加入100 μl降稀釋液再加10 μl標本,同時3次混勻。根據報道第1種方式易致非特異性IgC吸附到包被抗原或固相載體上,第2種方式在大量標本檢測時亦不適用,以第3種方式為好。
 
  4 溫育37 ℃溫育常采用三種方式即恒溫培養箱,水浴箱和電熱塊。根據報道以恒溫箱為主。由于培養箱中板的周圍都是37 ℃,而水浴箱的溫度指標是水的溫度,雖然酶標板漂浮在37 ℃水浴中板底37 ℃,但空氣溫度在開蓋時會下降(尤其在冬季),溫度上升比培養箱慢,達到37 ℃所需時間長,導致吸光度下降。
 
  5 洗板一般適用8或12孔頭,應隨時注意孔頭是否堵塞,同時要求洗板后殘液<2 μl,即人工扣板墊紙不濕,浸泡時間>45 s.洗液預先用合格的蒸餾水配制并充分溶解,保持pH正常,定期清洗容器防止長菌長霉,這些都是防止花板,本底增設的重要措施。
 
  6 顯色嚴格按照說明書控制顯色時間、溫度以免人為造成吸光底升降,而影響結果,加終止液后及時比色。TMB被認為是ELISA反應中最佳色原底物,但終止15 min后高濃度都易產生灰褐色絮狀沉淀并伴黃色漸退吸光下降,建議終止15 min內及時比色。
 
  7 酶標儀性能評價與鑒定衛生部明確規定酶標試劑不得用目測法判定結果,食品和設備是搞好質控和日常工作的前提和保證。所以酶標儀必須質量過關,性能穩定,有報道介紹以490 nm甲基橙溶液為例的酶標儀評價方法,內容包括濾光片波長、零點飄移、線性、精密度、通道差與孔間差等,具有較高的實用價值。經常維護其光學部分防止濾光片霉變,定期檢測校正,使其保持良好的工作性能。
 
  8 質控圖的制作ELISA室內質控方法一般沿用生化LJK圖進行,利用westgard規則判定失控,應首先做好OCV和RCVK以確定失控標準,在實際工作中取得好效果。“即刻法”質控只需連測3次即可對3次進行質控,給基層單位帶來了方便。但其SDI設置是套用生化手段,在免疫檢測是否適用尚無定論,同時LJ圖不能判ELISA的特異性,鑒于ELISA試驗目的在于檢出抗原或抗體,因此要確保敏感性和特異性,故有人提出臨界值血清界定法。試劑所設陰陽對照為內對照,另設臨界值,高值陽性和2份正常人陰性對照,作為外對照與標本同時檢測,臨界值S/CO>1,高值陽性S/CO>10,正常人陰性對照的A值在0.050~0.100,只要一項不符合即判為失控,高值為“HOOK”監控,因此臨界值血清界既反映ELISA的靈敏度又兼顧特異性,實際工作中和質控圖一起應用。
 
  9 結論室內質控的目的在于能控制實驗室每天的檢測結果是否可靠,能否報告結果,是實驗室管理的最基本措施。臨界值血清做室內質控血清可防止弱陽性發生標本漏檢,每次實驗時隨需血所致醫療糾紛的一個關鍵證據。實驗過程中失控現象時有發生且以超下限為多見,致臨界值結果陰性,此點引起特別重視,必須將失控板重做并找出原因,以確保報告準確性。由于開展了室內質控,工作人員責任心加強了,操作更規范,提高了實驗檢測的準確性,有效保證了血液質量。

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