一、動物的選擇

選擇合適的動物進行免疫極為重要。選擇時應考慮以直幾個因素：

①抗原與免疫動物的種屬差異越遠越好；親緣關系太近不易產生抗體應答（如兔－大鼠之間，雞－鴨之間）。

②抗血清量的需要：大動物如馬、騾等可獲得大量血清（一頭成年馬反復采血可獲得10000ml以上的抗血清）；但有時抗體需要是不多，選用家兔或豚鼠即可。

③抗血清的要求：抗血清可分為R型和H型。H型抗血清用于沉淀反應較難掌握，因而極少應用。

④抗原的選擇：對蛋白質抗原，大部分動物皆適合常用的是山羊和家兔。但是，在某些動物體內有類似的物質或其它原因，對這些動物免疫原性極差，如IgE對綿羊、胰島素對家兔、多種酶類（如胃蛋白酶原等）對山羊等，免疫時皆不易出現抗體。這些物質有時可以用豚鼠（如胰島素等）、火雞、甚至豬、狗、貓等作試驗免疫。

⑤甾體激素免疫多用家兔；酶類免疫多用豚鼠。

二、免疫劑量、時間和途徑

免疫原合適劑量的選定應考慮抗原性強弱、分子量大小和免疫時間。抗原需可量多，時間間隔長，劑量可適當加大。大動物抗原劑量（以蛋白抗原為準）約0.5～1mg/只，小動物約0.1～0.6mg/只。有時主觀希望加強免疫效果而不適當地加大劑量，往往會弄巧成拙。因為劑量加大極易造成免疫耐受（免疫抑制）而遭失敗。已有證明，幾微克的蛋白質也能很好地免疫出抗血清。

免疫注射的途徑也很重要。一般采用多點注射，一只動物注射總數約為8～10點，包括足掌及肘窩淋巴結周圍，背部兩側、頜下、耳后等處皮內或皮下，皮內易引起細胞免疫反應，對提高抗體效價有利。但皮內注射較困難，特別是天冷時更難注入（因佐劑加入后粘度較大）。其他途徑還有肌內、腹腔、靜脈、腦內等，但較少應用。如抗原極為寶貴可采用淋巴結內微量注射法，抗原只需10～100μg；方法是先用不完全佐劑在足作基礎免疫（預免疫），10～15天后可見肘窩處有腫大的淋巴結（有時在腹股溝處觸及），用兩手指固定好淋巴結，消毒后用微量注射器直接注射入抗原（一般不需要佐劑）。

免疫間隔時間也是重要因素，特別是首次與第二次之間更應注意。第一次免疫后，因動物機體正處于識別抗原和B細胞增殖階段，如很快接著第二次注入抗原，極易造成免疫抑制。一般以間隔10～20天為好。二次以后每次的間隔一般為7～10天，不能太長，以防刺激變弱，抗體效價不高。對于半抗原的免疫間隔則要求較長，有的報告1個月，有的長達40～50天，這是因為半抗原是小分子，難以刺激機體發生免疫反應之故。免疫的總次數多，多為5～8次。如為蛋白質抗原，第八次免疫未獲得抗體，可在30～50天后再追加免疫一次；如仍不產生抗體，則應更換動物。半抗原需經長時間的免疫才能產生高效價抗體，有時總時間為一年以上。