非標(biāo)記抗體酶法：PAP法是檢驗(yàn)技師考試的內(nèi)容，相關(guān)內(nèi)容供大家參考。

　　1.PAP的特征：PAP復(fù)合物的形成不同于其他抗原抗體反應(yīng)，在抗原稍過量時，所有的抗HRP抗體均參與形成可溶性PAP復(fù)合物，僅殘留少許游離的HRP，而大多數(shù)抗原抗體反應(yīng)需要抗原絕對過量才能形成可溶性復(fù)合物。PAP復(fù)合物的形狀相當(dāng)穩(wěn)定，不受抗原量的影響，無論最初加入的抗原抗體過量與否，最終形成的PAP復(fù)合物其HRP/抗HRP之比絕大部分為3：2.應(yīng)用離心沉降、液相擴(kuò)散等方法分析表明：PAP復(fù)合物沉降系數(shù)為ll.5s，分子量為400～430kD，由此可推算出酶與抗體之比為3：2，即每個PAP生命物由3個HRP分子和2個抗HRP抗體組成，呈五角形結(jié)構(gòu)，3個角為HRP，另兩個角為抗HRP抗體。采用H202-DAB染色，電鏡下已經(jīng)觀察到PAP復(fù)合物五角形環(huán)狀結(jié)構(gòu)，直徑平均21nm.這種結(jié)構(gòu)異常穩(wěn)定。據(jù)報(bào)告PAP復(fù)合物的抗HRP抗體與HRP結(jié)合常數(shù)為108，在此可溶性復(fù)合物中，即使存在少量游離HRP，亦不影響其穩(wěn)定性。

　　2.PAP染色原理及步驟

　　原理：與酶橋法相似，都是借助橋抗體將酶連結(jié)在與組織抗原結(jié)合的第一抗體上，所不同的是PAP法將酶橋法的步驟3、4合并為1，用PAP復(fù)合物代替，即第三步用PAP復(fù)合物孵育切片，故稱PAP法。PAP復(fù)合物中的抗HRP抗體和第一抗體為相同種屬動物的IgG，所以橋抗體能夠作為“橋”將PAP復(fù)合物連結(jié)在第一抗體上。

　　3.PAP法的評價(jià)：PAP法應(yīng)用比較廣泛，特別是近幾年，PAP、ABC等試劑盒商品化，在科研和臨床病理診斷等中有著廣闊的前景。