非標記抗體酶法:酶橋法是檢驗技師考試的內容,相關內容供大家參考。
基本原理:首先用酶免疫動物,制備效價高、特異性強的抗酶抗體,然后使用第二抗體作橋,將抗酶抗體連結在與組織抗原結合的第一抗體上,再將酶結合在抗酶抗體,經呈色顯示抗原的分布。在此過程中,任何抗體均未被酶標記,酶是通過免疫學原理與抗酶抗體結合,避免了共價連結對抗體和酶活性的損害,提高方法的敏感性,且能節省第一抗體的用量。
酶橋法克服了酶標抗體法的缺點,較好地保護了抗體和酶活性。但仍有其不足:①在酶抗體血清中,含有低親合力和高親合力兩類抗體,它們作為抗原與橋抗體結合,主要依賴于橋抗體對它的親合力,而與其本身對酶的親合力無關,故兩者均可被連結在橋抗體上。低親合力的抗酶抗體與酶結合較弱,漂洗時易解離,使大部分酶(70%左右)丟失,降低了方法的敏感性。②第三步所用的抗酶抗體血清中,亦含有非特異性抗體,其抗原性與抗酶抗體相同,所以能與橋抗體結合,但不能與酶結合,影響組織抗原的顯示。