（一）免疫金的特性

　　膠體金可以和蛋白質等各種大分子物質結合，在免疫組織化學技術中，習慣上將膠體金結合蛋白質的復合物稱為金探針。用于免疫測定時膠體金多與免疫活性物質（抗原或抗體）結合，這類膠體金結合物常稱為免疫金復合物，或簡稱免疫金（immunogold）。

　　膠體金與蛋白質結合的機制尚有十分清楚，一般認為是物理吸附性的。膠體金顆粒帶有一層表面陰性電荷，與蛋白質表面的陽性電荷通過靜電感應相附。因此環境pH和離子強度是影響吸附的主要因素，其他如膠體金顆粒的大小、蛋白質的分子量及蛋白質濃度等也會影響蛋白質的吸附。

　　（二）免疫金的制備

　　1．用0.2mol/LK2CO3或0.1mol/LHC1調節膠體金溶液的pH至選定值。原則上可選擇待標記蛋白質等電點，也可略為偏堿。但通常最適反應pH往往需經多次試驗才能確定。

　　在調節膠體金的pH值時應注意，膠體金會阻塞pH計的電極，不可直接將電極插入膠體金溶液中，宜先用終濃度為0.15的聚乙二醇（PEG，20000）穩定膠體金后，再膠體金的pH值。

　　2．將1/10體積的合適濃度的蛋白質溶液加于膠體金溶液中，放置室溫反應2～5min。

　　由于鹽類成分能影響膠體金對蛋白質的吸附，并可使膠體金聚沉，因此待標記蛋白質溶液若含有較高的離子濃度，應在標記前先對低離子強度的蒸餾水透析去鹽。

　　3．加入濃度為0.2％的PEG或BSA以飽和游離的膠體金。

　　4．離心分離，去除上清液中未結合的蛋白質。離心條件視膠體金顆粒的粒徑而異：對5nm金顆粒可選用40000r/min離心1h；8nm金顆粒用25000r/min離心45min；14nm金顆粒用25000r/min離心30min，40nm金顆粒用15000r/min離心30min。

　　5．輕吸上清液。沉淀用含PEG或BSA的緩沖液懸浮，恢復原體積后再離心。如此洗滌2～4次。以徹底除去未結合的蛋白質。

　　6．免疫金復合物最終用稀釋液配制成工作濃度保存。稀釋液通常是加入穩定劑的緩沖液。緩沖溶液常用中性的PBS或Tris緩沖液。

　　多種蛋白質、葡聚糖、PEG2000、明膠等均為良好的高分子穩定劑，PEG和BSA是最常用的穩定劑。穩定劑有兩大作用：一為保護膠體金的穩定性，使之便于長期保存；二為防止或減少免疫金復合物的非特異性吸附反應。穩定劑的合理選擇是十分重要的，不適當的穩定劑有時也會導致非特異性反應。